MH-S細胞為半貼壁半懸浮生長的轉化細胞系，對凍存與復蘇過程較為敏感，因此規范的凍存操作是維持其活性、功能和遺傳穩定性的重要保障。以下是詳細的保存建議：
MH-S細胞凍存關鍵步驟
?選擇合適時機?
在細胞處于?對數生長期、狀態良好且未污染?時進行凍存，通常在傳代前一晚換液，確保細胞健康活躍 。
?消化與收集細胞?
棄去舊培養基，用不含鈣鎂離子的PBS輕柔潤洗一次。
加入0.25%胰酶-EDTA（T25瓶加1 mL），37℃消化1–2分鐘，顯微鏡下觀察細胞變圓即終止 。
加入含10% FBS的完全培養基終止消化，輕柔吹打混勻。
將懸浮細胞與消化后的貼壁細胞合并，1000 rpm離心5分鐘，棄上清。
?配制凍存液?
推薦配方：
?55% RPMI-1640基礎培養基?
?40% 胎牛血清（FBS）?
?5% DMSO（二甲基亞砜）?
注意：DMSO需現用現配，避免毒性積累；也可使用市售無血清凍存液替代 。
?重懸與分裝?
用預冷的凍存液重懸細胞，調整密度至 ?5×10? ~ 1×10? cells/mL?。
分裝至2 mL凍存管中，每管0.25–1 mL，標記細胞名稱、代次和日期。
?程序降溫?
將凍存管放入?程序降溫盒?中（或置于-80℃冰箱過夜），再轉入液氮長期保存。
若無程序降溫設備，可采用梯度降溫法：4℃ 30 min → -20℃ 2 h → -80℃ 2 h → 液氮 。
?長期儲存?
?液氮氣相中可長期保存?（>5年），避免直接浸入液相以防凍存管破裂或污染 。
建議每半年復蘇一支檢測細胞活性，確保凍存質量。
