基本信息：

定義與來源

- 定義：大鼠原代細胞是直接從大鼠組織或器官中分離、未經長期傳代培養的細胞，保留了細胞在體內的原始生物學特性。
- 來源：常見供體為4-6周齡、體重150-200g的SD或Wistar大鼠，組織來源包括肝臟、肺、腦、肌肉等。

特點

- 生理相關性：與大鼠體內細胞功能高度相似。
- 有限增殖能力：體外傳代次數通常不超過5-10代，避免傳代過程中細胞特性丟失。
- 異質性：同一組織分離的細胞可能包含多種類型（如肝細胞與肝竇內皮細胞），需通過純化（如密度梯度離心、流式細胞術）提高純度。
- 倫理要求：需遵循實驗動物倫理規范，確保來源合規。

分離與培養關鍵步驟

- 分離方法：
- 酶消化法：常用膠原酶、胰蛋白酶消化組織（如肝臟剪碎后用膠原酶IV消化），獲得單細胞懸液。
- 機械分離法：適用于易碎組織（如腦組織），通過研磨、篩網過濾獲取細胞。
- 培養條件：
- 培養基：根據細胞類型選擇（如肝細胞用Williams E培養基，神經元用Neurobasal培養基），常添加胎牛血清（5%-10%）、生長因子（如EGF、bFGF）。
- 環境：37℃、5% CO?培養箱，貼壁細胞需鋪基質（如膠原、纖連蛋白）促進貼壁。

注意事項：

該細胞只可用于科研。出現以下情況不予以重發：客戶造成細胞污染；客戶不正確操作致細胞狀態不好；細胞狀態不好，未提供細胞培養前3天照片；細胞培養時經其它處理；細胞收到2天內，未告知相關情況。

細胞操作步驟:

傳代步驟：

棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1 - 2次。
加2ml消化液（0.25% Trypsin - 0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1 - 2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
按6 - 8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1 - 2mL培養液后吹勻。
將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
復蘇步驟：
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1 - 2mL培養基后吹勻。換液并檢查細胞密度。
凍存步驟：
以T25瓶為例：
細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1 - 2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
1000RPM離心5分鐘去掉上清，用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。
將凍存管置于程序降溫盒中，放入 - 80℃冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存，記錄凍存管位置以便下次拿取。
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