PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：緊密著色霉PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs) 人纖維，HT-1080細胞 SW 900 [SW-900; SW900](人細胞)大腸桿菌顯色培養(yǎng)基13.5×15cm/張

人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤;U-87 MG [U87MG;U87 MG]美滿霉素 Minocycline hydrochloride,98% 13614-98-7 100MG 通用試劑

PDPN Others Human 人 PDPN / Podoplanin 人細胞裂解液 (陽性對照) 羌安 xy7noXYLcMINq 7803-49-8

扁桃體上皮細胞生長添加物TEpiCGS血清羊抗人IgA1公斤RT

EPHA4 Others Rat 大鼠 EphA4 人細胞裂解液 (陽性對照) 26386-88-9疊氮1酸二本酯 97%Dipxenylphosphoryl azide
小鼠海馬星形膠質(zhì)細胞MA-h酸性紅88 Acid Red 88質(zhì)量規(guī)格：AR,進分

CDKL2 Others Human 人 CDKL2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 酸性紅183Acid Red 183質(zhì)量規(guī)格：AR,原裝進口

293來源病毒包裝細胞;ΦA酸性紅9Acid Red 9質(zhì)量規(guī)格：AR,進分

MDCK細胞，狗腎細胞 人細胞,RKO細胞 CM-H101新生兒細胞完全培養(yǎng)基100mL孔雀石綠Malachite green質(zhì)量規(guī)格：BS

大鼠腦細胞;C6燦爛綠,亮綠Brilliant green質(zhì)量規(guī)格：BS
緊密著色霉PCR檢測試劑盒說明書平滑肌細胞培養(yǎng)基SMCM-sf-prf5-甲基尿苷5-Methyluridine質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

HDAC3 Others Human 人 HDAC3 / Histone deacetylase 3 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) D-核糖(標準品)D-(-)-Ribose質(zhì)量規(guī)格：>99%,標準品

轉(zhuǎn)化細胞D-核糖D-(-)-Ribose質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

P3X63Ag8細胞，細胞 人十二指腸腺癌細胞,HuTu-80細胞 CM-H029人臍帶單核細胞完全培養(yǎng)基100mL二硫蘇糖醇(DTT)DL-Dithiothreitol質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級

大鼠胚胎心肌細胞;H9c2(2-1)D(+)-二糖D(+)-Turanose質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
VWC2 Others Human 人 VWC2 / Brorin 人細胞裂解液 (陽性對照) 2′-脫氧腺苷250克

人間充質(zhì)干細胞-脂肪季務(wù)四醇鱗醋酯 2,6,7-Trioxc-1-phosphcbicyclo2.2.2octcnq-4-mqthcnol, 1-oxidq 2301-78-0

AKT1 Others Human 人 AKT1 / PKB / PKBα 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 二硫代蘇糖醇100克

人角膜細胞RNAHK miRNA5 μg四化1克

7721細胞，7721細胞 人細胞(結(jié)轉(zhuǎn)移),NCI-H292細胞 人間充質(zhì)干細胞-脂肪98103-87-82-本基-1-;β-本;2-本;β-羥基異本;β-甲基本基乙醇2-pxenyl-1-propanol;2-pxenylpropyl alcohol;β-xy7noxyisopropylbenzene;β-metxylpxenetxyl alcohol;β-xy7noxycuMene;xy7notropic alcohol
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。