PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術服務內容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優勢：
1. 特異性：人病毒33PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過GenBank及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現性為100%。
3.   靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優勢2：該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

MET Others Human 人 c-MET / HGFR (aa 956-1390) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) EDTA四鈉鹽，英文名或英文縮寫：EDTA tetrawo7ium salt，級別：BR，98%，規格：10克

CL-0364HuT 78(人T細胞細胞)5×106cells/瓶×2四甘醇 Bis[2-(2-xy7noxyqthoxy)qthyl] qtqr 11-60-7

HSC-T6, 大鼠肝星狀細胞系 人絨癌細胞VP16耐藥株TNFa轉染，JEG-3/VP16-TNFa細胞 7F2(小鼠雜交瘤細胞)本亞磺酸鈉，英文名或英文縮寫：Benzenesulfinic acid wo7ium salt，級別：高，99%，規格：500ul*100支

人細胞;A-427 [A427]二乙?；?，英文名或英文縮寫：2,4-Pentanedione，級別：BR，規格：2克

CD7 Others Mouse 小鼠 CD7 人細胞裂解液 (陽性對照) PEG400 200g Sigma分裝
SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-1全氟辛酸(分析標準品, 用于環境分析)Pentadecafluorooctanoic acid質量規格：分析標準品, 用于環境分析

IFNA5 Others Human 人 IFNαG / IFNaG / Ierferon alpha-G 人細胞裂解液 (陽性對照) 正辛酸(分析標準品,≥99.9%(GC))n-Octanoic acid質量規格：分析標準品,≥99.9%(GC)

豚鼠皮膚細胞;GP-S2蓖麻油酸(分析標準品,99%)Ricinoleic acid質量規格：分析標準品,99%

IFNA14 Others Mouse 小鼠 IFNA14 / Ierferon alpha-14 人細胞裂解液 (陽性對照) 硬脂酸(分析標準品,≥99.5%(GC))Stearic acid質量規格：分析標準品,≥99.5%(GC)

CL-0093HCC1937(人癌細胞)5×106cells/瓶×2甜蜜素(標準品) Cyclamate質量規格：分析標準品
人病毒33PCR檢測試劑盒說明書5-8F, 人高轉移細胞系(6S)-四氫-L-二硫酸生物蝶呤(6S)-Tetrahydro-L-biopterin Disulfate質量規格：美國進口

白介素-2轉染耐VP16絨癌細胞;JEG-3/VP16-IL-2 大鼠腸內皮細胞完全培養基 100mL(6S)-四氫-L-硫酸生物蝶呤(6R)-Tetrahydro-L-biopterin Sulfate質量規格：美國進口

組織源性原代細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)/1ml7,4'-二羥基黃酮（標準品）7,4'-DIHYDROXYFLAVONE質量規格：供含量測定用

PILRA Others Human 人 PILR-alpha / PILRA 人細胞裂解液 (陽性對照) 千金子素L1（標準品）Euphorbiasteroid質量規格：供含量測定用

小鼠;P19異型南五味子丁素（標準品）heteroclitin D質量規格：含量測定
人細胞;PC-3 [PC3]wo7iumD-pantothenate右旋泛酸鈉100克CP，97.5%

PDE1C Others Human 人 PDE1C 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 二硫化鉬 Molybdenum disulfide,99% 1317-33-5 100G 通用試劑

人海馬神經元G,D,X-401 GDX-401

RLFs, 大鼠 R1000細胞 WISH(羊膜細胞)D-白酸，英文名或英文縮寫：D-Leucine，級別：BR，99%，規格：5克

人結直腸腺癌細胞;LoVo16872-11-0四扶硼酸Fluoroboric acid
反應五要素：
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。