技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：綿羊病毒1型PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
1-Testosterone  1965/6/5  中文名：1-睪酮  分子式：C19H28O2    人轉(zhuǎn)移因子(TF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Canrenone  976-71-6  中文名：坎利酮  分子式：C22H28O3    人轉(zhuǎn)移生長因子β1（TGF-β1）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Prednisone 21-acetate  125-10-0  中文名：醋酸潑尼松  分子式：C23H28O6    人狀瘤病毒抗體IgG(HPV-IgG)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Clotrimazole  23593-75-1  中文名：克霉唑  分子式：C22H17ClN2    人狀瘤病毒抗體(HPV)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

1-Cyclopropyl-6,7-difluoro-1,4-dihydro-8-methoxy-4-oxo-3-quinolinecarboxylic acid  112811-72-0  中文名：  分子式：C14H11F2NO4    人瘤病毒58（HPV-58）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
Kisser'sMouingMedium                    Anthraquinone  中文名：蒽醌  分子式：C14H8O2 

itonX-100   250ml                 3-Amino-4-hydroxybenzoic acid  中文名：3-氨基-4-羥基苯甲酸  分子式：C7H7NO3 

Isicacidsalt   100g                 Pseudoprotodioscin  102115-79-7  中文名：偽原薯蕷皂苷  分子式：C51H82O21 

is,   500g  3-Amino-4-methylbenzamide  19406-86-1  中文名：3-氨基-4-甲基苯甲酰胺  分子式：C8H10N2O 

IPTG,DioxaneFree   100g  Pseudoprotodioscin  中文名：偽原薯蕷皂苷  分子式：C51H82O21
綿羊病毒1型PCR檢測試劑盒說明書家貓皮膚細胞;FCA-S1 胚，HFL-I細胞 IEC-6細胞，大鼠小腸隱窩上皮細胞檸檬酸三丙酯(>97.0%(T))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)Tripropyl

人正常肺上皮細胞;BEAS-2BN-丁基苯磺酰胺(>98.0%(HPLC)(N))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(N)N-Butylbenzenesulfonamide

CD200R1L Others Cynomolgus 食蟹猴 CD200RLa 人細胞裂解液 (陽性對照) D-(+)-樟腦(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(+)-Camphor

原代成纖維細胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml阿卡波糖十三醋酸酯質(zhì)量規(guī)格：美國進口Acarbose Tridecaacetate

CD38 Others Rabbit 兔 SCARB3 人細胞裂解液 (陽性對照) 檸檬苦素，黃柏內(nèi)酯(橙皮提取) 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,橙皮提取Limonin
TF-1(人血液細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠細胞;BC3H1CHAPSO3-[(3-膽胺基)二甲基基]-2-羥基-1-磺酸內(nèi)鹽25克ACS

人間充質(zhì)干細胞-肝臟裂解物HMSC-hp L沒食子酸一水物 Gallic acid,≥98.0% 99-24-1 25G 通用試劑

AXR2 Others Mouse 小鼠 AXR2 / CMG2 人細胞裂解液 (陽性對照) 肝速內(nèi);肝速;肝鱗脂 Hqpcrin wo7ium sclt;Hqpscl;Lipohqpin;LiquqMin;Lipohqpinqttq;Longhqpcrin;Monopcrin;Pcnhqprin;Pulcrin 9041-8-1

正常小鼠Leydig細胞;TM3選擇性巧克力平板1米

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細胞;PUMC-mips-D2 III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL13494-80-9碲塊Tellurium