牛睪丸透明質(zhì)酸酶樣品DNA的制備:
1.用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。。也可以選購本公司的一管式病毒DNAOUT或其升級(jí)版柱式病毒 DNAOUT。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送15次DNA病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAOUT的成分)。稀釋陽性對(duì)照(以10E2-10E7這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行干萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供可以直接使用的長(zhǎng)為86bp的DN段作為陽性對(duì)照。
2.標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2
3用帶芯槍頭分別加入45L模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同
4.在7號(hào)管中加入5uL1x10E8持貝L的陽性對(duì)照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝L的陽性對(duì)照。放冰上待用。5.換槍
頭,在6號(hào)管中加入5uL1×10E7拷貝L的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝μ的陽性對(duì)照。放冰
6換槍頭,在5號(hào)管中加入5uL1×10E6拷貝L的陽性對(duì)照到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝L的陽性對(duì)照放冰上待用。
7換槍頭,在4號(hào)管中加5uL1x10E5拷貝L的陽性對(duì)照到4號(hào)管中,得1×10E4拷貝L的陽性對(duì)照。放冰上待用。
8.重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。設(shè)置qPCR反應(yīng)(20L體系,在樣品制備室進(jìn)行
9.在PCR管中加入下列成分(待測(cè)樣品需要做三次重復(fù),下表只列出一次。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照,并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后后加)注意事項(xiàng)。
