大鼠原代子宮內(nèi)膜上皮細胞注意事項

大鼠原代子宮內(nèi)膜上皮細胞注意事項：

1.收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。

3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。

4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。續(xù)寫內(nèi)容：

5. 細胞復蘇后，建議先進行低密度傳代（1:2或1:3），避免因運輸應激導致細胞狀態(tài)不佳而影響后續(xù)實驗。傳代時需使用預溫的PBS輕柔洗滌，消化時間控制在1-2分鐘（視細胞貼壁情況調(diào)整），加入含血清的培養(yǎng)基終止消化后，輕柔吹打至單細胞懸液，離心后重懸接種。首次傳代后24小時內(nèi)避免頻繁移動培養(yǎng)瓶，以減少機械震動對細胞貼壁的影響。

6. 培養(yǎng)基更換頻率需根據(jù)細胞密度和代謝情況調(diào)整，通常每48小時更換一次。若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基迅速變黃（pH下降），可能提示細胞代謝旺盛或存在污染，需立即排查。建議使用原裝配套培養(yǎng)基，若自行配制，需確保添加了適宜濃度的生長因子（如EGF、胰島素等）及雙抗（青霉素-鏈霉素混合液）。

7. 凍存?zhèn)浞菔情L期實驗的重要保障。建議在細胞狀態(tài)最佳時（對數(shù)生長期，融合度80%-90%）進行凍存，凍存液配方需含10%DMSO和90%胎牛血清，程序降溫后轉(zhuǎn)入液氮保存。每次凍存至少保留3管以上，并標注清晰代次、日期及操作人信息。

8. 實驗人員需定期檢查培養(yǎng)箱參數(shù)（37℃、5% CO?、飽和濕度），尤其是CO?濃度波動可能導致培養(yǎng)基pH異常。若細胞出現(xiàn)空泡化、顆粒增多或增殖停滯，需排查支原體污染（建議每月用熒光染色法檢測一次），污染樣本應立即滅菌廢棄，并對培養(yǎng)環(huán)境徹底消毒。