抗體驗證是生物實驗中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其活性直接影響研究結(jié)果的可靠性。以下是幾種常用的活性驗證方法及其注意事項：
一、ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實驗）
?原理?：通過顯色反應(yīng)判斷抗體與目標(biāo)蛋白的結(jié)合能力，顯色越深，活性越高。
?操作要點?：
用已知抗原包被微孔板，加入待測抗體孵育。
加入酶標(biāo)二抗，顯色后測OD值，OD值越高，活性越好。
?適用場景?：快速篩選抗體批次，適合高通量檢測。
二、Western Blot（蛋白質(zhì)印跡法）
?原理?：通過特異性抗體檢測目標(biāo)蛋白，條帶清晰、位置正確即表明活性良好。
?操作要點?：
提取蛋白，SDS-PAGE電泳分離后轉(zhuǎn)膜。
用待測抗體孵育，顯色后觀察條帶。
?適用場景?：驗證抗體的特異性，尤其適合復(fù)雜樣本。
三、其他方法（按需選擇）
?免疫熒光（IF）?：通過熒光信號定位抗體在細胞中的結(jié)合位置，適合細胞水平驗證。
?免疫沉淀（IP）?：富集目標(biāo)蛋白后檢測，適合驗證抗體在天然狀態(tài)下的活性。
四、注意事項
?樣本處理?：避免反復(fù)凍融，使用蛋白酶抑制劑防止降解。
?對照設(shè)置?：一定要設(shè)陽性/陰性對照，確保結(jié)果可靠。
?設(shè)備校準(zhǔn)?：定期維護儀器，保證檢測準(zhǔn)確性。
