抗體驗證是生物實驗中的關鍵環節，其活性直接影響研究結果的可靠性。以下是幾種常用的活性驗證方法及其注意事項：
一、ELISA（酶聯免疫吸附實驗）
?原理?：通過顯色反應判斷抗體與目標蛋白的結合能力，顯色越深，活性越高。
?操作要點?：
用已知抗原包被微孔板，加入待測抗體孵育。
加入酶標二抗，顯色后測OD值，OD值越高，活性越好。
?適用場景?：快速篩選抗體批次，適合高通量檢測。
二、Western Blot（蛋白質印跡法）
?原理?：通過特異性抗體檢測目標蛋白，條帶清晰、位置正確即表明活性良好。
?操作要點?：
提取蛋白，SDS-PAGE電泳分離后轉膜。
用待測抗體孵育，顯色后觀察條帶。
?適用場景?：驗證抗體的特異性，尤其適合復雜樣本。
三、其他方法（按需選擇）
?免疫熒光（IF）?：通過熒光信號定位抗體在細胞中的結合位置，適合細胞水平驗證。
?免疫沉淀（IP）?：富集目標蛋白后檢測，適合驗證抗體在天然狀態下的活性。
四、注意事項
?樣本處理?：避免反復凍融，使用蛋白酶抑制劑防止降解。
?對照設置?：一定要設陽性/陰性對照，確保結果可靠。
?設備校準?：定期維護儀器，保證檢測準確性。
